EXTRACCIÓN DE ADN

 

OBJETIVO: el ADN se extrae porque sus cargas negativas atraen los iones salinos, los disuelven y permiten la extracción de la célula. Vamos a extraer ADN de una hoja de lechuga y un plátano tomando sus trozos con un poco de agua. De esta forma conseguiremos un caldo molecular que, al mezclarlo con una disolución tampón con detergente, hará que se disuelva el ADN. La mezcla tendrá principalmente ARN, carbohidratos y proteínas. Con alcohol isoamílico extraeremos posteriormente el ADN, ya que funciona como reactivo.

MATERIALES: necesitamos lo siguiente:

• Materiales de laboratorio:
• Papel secante
• Tubos de ensayo
• Vaso de precipitados
• Nevera
• Varilla fina
• Mortero
• Pipetas
• Gradilla
• Colador
• Reactivos:
• Alcohol isoamílico a 0 ºC
• 5 ml de detergente Fairy
• 1,5 g de sal de mesa
• 5 g de bicarbonato sódico
• Granos de arena
• Materiales biológicos:
• Hoja de lechuga
• Plátano
• 120ml de agua destilada

METODOLOGÍA: vamos a seguir los siguientes pasos:

1. Preparamos el tampón mezclando 120ml de agua destilada, 1,5 g de sal de mesa, 5 g de bicarbonato sódico y 5 ml de detergente. Después, lo metemos en la nevera.
2. Partimos en cuadraditos la hoja de lechuga, la echamos al mortero y, con un poco de agua, trituramos y removemos hasta obtener una especie de caldo. Podemos ayudarnos con unos granos de arena para que se rompan las células. Posteriormente, con un colador retiramos los restos sólidos de arena y lechuga y dejamos el líquido en un vaso.
3. En un tubo de ensayo echamos 5 ml de la mezcla con una pipeta, y 10 ml del tampón previamente preparado con otra pipeta. Agitamos la mezcla durante unos minutos fuertemente.
4. En otro tubo de ensayo echamos 5 ml de la mezcla y añadimos, dejando escurrir lentamente por la pared del tubo de ensayo, 10 ml del alcohol isoamílico, que debe haber estado previamente guardado en la nevera, para que esté a 0ºC. El alcohol debe quedar flotando sobre la mezcla.
5. Cogemos la varilla y removemos hacia delante y hacia atrás para hacer subir el ADN por ella, y observamos los resultados. Una vez completada la práctica con la hoja de lechuga, realizamos exactamente el mismo proceso con el plátano cortado en trozos.

RESULTADOS: podemos observar una zona de un color entre blanco y transparente en la parte superior de la mezcla. Se trata del ADN de las muestras.

Extracción de ADN de una hoja de lechuga. La zona blanca corresponde la ADN.

Muestra de extracción de ADN del plátano de las compañeras Vega Alonso y Ana García, debido a que a nosotras no nos dio tiempo a realizarla y nos faltó agregarle el tampón a la mezcla.

CONCLUSIONES: con los resultados obtenidos, hemos podido observar el ADN de la hoja de lechuga y del plátano, y tienen un aspecto similar al algodón mojado. Cabe destacar que realmente también había ARN, y para limpiarlo completamente podríamos haber utilizado zumo de piña.